單一蛋白質或者蛋白混合物的蛋白質譜鑒定/分析,以及對單一蛋白質的蛋白序列分析是生物學研究中經常遇到的問題。基于質譜法獲取蛋白質序列的序列信息以及通過質譜法進行蛋白質質譜鑒定,蛋白質譜分析從而實現蛋白質鑒定,既protein identification,基于LC-MS的蛋白質譜鑒定。常見分析包括:質譜測定蛋白分子量,蛋白的N端和C端測序,蛋白質序列分析及,翻譯后修飾位點分析等。
百泰派克公司采用超高分辨率質譜技術,基于Thermo Fisher公司的Q Exactive質譜儀、LTQ Orbitrap Elite質譜儀、Orbitrap Fusion™ Lumos™ Tribrid™ 質譜儀,結合 Nano-LC液相色譜技術,能夠對蛋白質提取物、SDS-PAGE蛋白條帶、2D蛋白膠點、pull-down及co-IP等樣品中的蛋白質進行高效精準的蛋白質譜鑒定服務。
1,對純化蛋白進行蛋白質質譜分析/質譜鑒定;
2,對蛋白膠點,蛋白質膠條質譜鑒定,蛋白銀染膠質譜鑒定,考染/熒光/Zn/Cu2+等類型染色的膠點/膠條樣品進行鑒定;可參見:蛋白膠點、膠條、IP樣品蛋白質鑒定服務
3,對pull-down蛋白質譜鑒定、IP蛋白互作的IP-MS互作蛋白鑒定、co-IP質譜驗證互作蛋白,免疫共沉淀結合質譜驗證,等簡單混合物樣品中的蛋白樣品進行蛋白質鑒定/分析。
4,對復雜樣品中的未知蛋白質進行蛋白質譜分析/蛋白質譜鑒定。即使是非常低濃度的蛋白樣品也可能通過蛋白質譜鑒定
對于單一蛋白質和簡單蛋白混合物的鑒定,我們保證100%的鑒定率,否則不收任何費用。
NanoLC-MS/MS分析簡單或復雜混合物中的蛋白質質譜分析。樣品可以是來自于SDS-PAGE凝膠中的條帶或蛋白點,也可以是溶液樣品。(我司也提供1D 或2D SDS-PAGE服務,點擊了解詳情。)
樣品前處理
*先,用二硫蘇糖醇(DTT)還原蛋白質樣品,用碘乙酰胺(IAA)烷基化。然后用胰蛋白酶對樣品進行消化,一般樣品會在賴氨酸和精氨酸殘基后發生斷裂。*后,凍干得到多肽片段。
上機分析
將樣品用NanoLC的A相重新溶解后上樣,在NanoLC-MS/MS系統下分析。
數據庫檢索
根據樣品物種來源從UniProt下載對應物種的蛋白質組數據庫,使用MaxQuant、Proteome Discoverer、Peaks等軟件將液質聯用得到的數據與數據庫中數據進行匹配,通過肽段的一級和二級碎片的質量在數據庫中找到匹配的蛋白質,從而鑒定樣品中的蛋白質。
如果樣品的物種還沒有完整的蛋白質組數據庫,我們將使用親緣較近物種的蛋白質組數據庫或者是同種模式生物的蛋白質組數據庫進行蛋白鑒定分析。
出具報告
鑒定報告中會包括詳細的樣品前處理步驟,色譜-質譜平臺參數,以及鑒定得到的蛋白質列表和肽段列表。質譜原始數據會通過網盤形式提供。
您只需把您的樣品收集后提供給我們,后續所有步驟均由我們完成。百泰派克公司基于質譜的蛋白質質譜鑒定/質譜分析服務包括:樣品前處理-蛋白還原烷基化后使用高度特異性的蛋白酶進行蛋白樣品消化,獲得多肽片段;上機分析-通過納升級色譜(nano-flow)結合高分辨率質譜,在*高的靈敏度下對肽段進行分離并使用超高分辨率質譜儀采集肽段質譜數據;數據庫檢索-結合樣品物種對應的蛋白質數據庫對成千上萬張質譜圖進行分析(使用Uniprot數據庫,每月更新一次數據庫,以確保訪問*新數據),從而實現樣品中蛋白的蛋白質質譜鑒定;到*后出具樣品報告,均由百泰派克公司一站式完成:
1. 客戶提供了包含一種或多種蛋白質的樣品,如膠條,膠帶,溶液或固體樣品,pull-down或co-IP樣品。
2. 百泰派克公司根據樣品情況,選擇合適的酶,對來樣進行蛋白酶消化,然后進行nanoLC-MS / MS分析。
3. 對獲取的數據進行搜庫分析。
4. 在10-15個工作日內收到報告。
*如果您的樣品中含有洗滌劑/裂解劑,請在送樣單中注明。